常见的细胞辅助试剂及其应用

　　细胞辅助试剂在细胞培养、流式细胞术等实验中发挥着关键作用，它们能够优化实验条件、提高实验效率并确保结果的准确性。以下是一些常见的细胞辅助试剂及其应用：
 

　　一、细胞培养辅助试剂
 

　　L-谷氨酰胺
 

　　作用：细胞培养中细胞进行能量生成以及蛋白质和核酸合成所必需的一种营养素。
 

　　特性：不稳定，在中性溶液中会自发降解，降解率随保存温度而变。降解后生成的副产物氨对干细胞、原代细胞等具有毒性。
 

　　替代品：L-丙氨酰-L-谷氨酰胺，其在水溶液中稳定性高，可保持长时间稳定的营养供给，并降低分解产物造成的细胞毒性。
 

　　胰岛素
 

　　作用：对哺乳动物细胞具有多效合成作用，促进葡萄糖和氨基酸摄取、脂肪生成、单价阳离子和磷酸转运、蛋白质和核酸合成。
 

　　应用：MCF-7和NIH:OVCAR-3等细胞需要额外添加胰岛素以维持细胞状态。
 

　　β-巯基乙醇
 

　　作用：维持细胞内的还原环境，保护细胞免受氧化损伤。
 

　　应用：Thp-1和MC3T3-E1 subclone 14等细胞需要添加β-巯基乙醇以维持细胞状态。
 

　　平衡盐溶液
 

　　组成：主要由无机盐、葡萄糖组成。
 

　　作用：维持细胞渗透压平衡，保持pH稳定及提供简单的营养。同时用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等。
 

　　其他添加剂
 

　　非必需氨基酸(NEAA)：含几种非必需氨基酸的合剂，添加到原培养基中可提供更全面的营养支持。
 

　　HEPES：一种很强的缓冲剂，能使细胞培养基在pH7.2-7.6条件下缓冲能力增强，防止培养基pH迅速变动。
 

　　二、流式细胞术辅助试剂
 

　　红细胞裂解液
 

　　作用：利用低渗原理破碎血液或骨髓标本中的红细胞，消除红细胞产生的干扰，从而实现对白细胞的表面抗原的准确分析。
 

　　特性：温和的低渗条件下裂解红细胞，操作简单，红细胞裂解，性能稳定，产生细胞碎片少。
 

　　固定破膜剂
 

　　作用：对细胞悬液进行固定和破膜，使抗体顺利进入胞内，并使细胞形态仍然保存完整。可以减少实验中非特异性染色，在加入破膜剂时也可以加入荧光标记抗体进行染色。
 

　　特性：破膜后细胞分群保持完整，溶血、破膜、染色一步完成，操作简便，保持抗体的特异性、灵敏度以及可重复性。
 

　　刺激阻断剂
 

　　作用：刺激细胞活化，提高细胞因子分泌量，便于检测；同时阻断细胞因子分泌到细胞外，使其聚集在细胞内，提高检出率。
 

　　常用试剂：刺激素为Phorbol 12-Myristate 13-Acetate(PMA，佛波酯)和Ionomycin(离子霉素)，阻断剂为Brefeldin A(BFA，布雷非德菌素A)和Monensin(莫能霉素)。
 

　　流式染色缓冲液
 

　　作用：适用于悬浮细胞的免疫荧光染色实验，含BSA以叠氮钠作为防腐剂。可用于抗体和细胞的稀释，以及表面染色和流式分析的洗涤阶段。
 

　　特性：有效降低非特异性结合，适用于各种流式细胞术实验。
 

　　封闭试剂
 

　　作用：封闭细胞表面的Fc受体，减少抗体的非特异性结合，降低检测背景，获得更清晰的结果。
 

　　常用试剂：FcR阻断剂(如CD16和CD32抗体)。